Новый метод количественного масс-спектрометрического анализа белковых смесей
T4N3
Новый метод количественного
масс-спектрометрического анализа белковых
смесей с использованием селективных
изотопных меток на цистеин
М.В. Федяева,б, И.Э. Нифантьевб, А.В. Пшежецкийа,в,г
аSainte-Justine Hospital Research Center, University of Montreal, 3175 Côte
Ste-Catherine, Montreal (Quebec), H3T 1C5, Canada. E-mail: fedjaev@yahoo.com
бМосковский государственный университет им. М.В. Ломоносова,
химический факультет, Ленинские горы 1, стр. 3, 119992 Москва, Россия.
вDepartment of Anatomy and Cell Biology, Faculty of Medicine,
McGill University, Montreal, Canada.
гDepartment of Pediatrics and Biochemistry, Faculty of Medicine,
University of Montreal, Canada.
Поступила в редакцию 04.06.2007 г.
Наиболее признанной методологией в современной количественной протеомике является метод изотопного аналога, заключающийся во введении атомов стабильных изотопов ( 2 H, 15 N, 18 O, 13 C) в состав пептидов и белков. В то же время существующие подходы обладают рядом недостатков, связанных в основном с низкой селективностью введения изотопной метки и выделения меченных пептидов. Данная работа описывает новый метод количественного масс-спектрометрического анализа белковых смесей, основанный на быстрой и селективной модификации тиольных групп белков N-фенилмалеинимидом с последующим ковалентным выделением меченных пептидов на твердофазной матрице. Выделение осуществляется путем обработки меченных пептидов гидразином, которые затем связываются с иммобилизованным бензальдегидом с образованием гидразонов. Основными достоинствами разработанного метода являются введение изотопов и объединение сравниваемых образцов на самой первой стадии приготовления и последующее проведение всех операций с образцами в одних и тех же условиях, что позволяет обеспечить максимальную точность и воспроизводимость анализа. Данный метод использует быстрые и количественно протекающие химические реакции, позволяющие ковалентное связывание и выделение пептидов на матрице, а также их эффективную промывку, обеспечивая тем самым высокую специфичность выделения. Эффективность разработанного метода была продемонстрирована на примере анализа модельного белка − бычьего сывороточного альбумина.
