Cинтез и тестирование новой аффинной фазы

ВЕРНУТЬСЯ К ОГЛАВЛЕНИЮ

T5N3

Cинтез и тестирование новой аффинной фазы
для выделения и последующего масс-
спектрометрического анализа фосфопептидов

Е.Д. Каньшина,б, И.Э. Нифантьевб, А.В. Пшежецкийа,в,г

аSainte-Justine Hospital Research Center, University of Montreal,
3175 Côte Ste-Catherine, Montreal (Quebec), H3T 1C5, Canada.
E-mail: KanshinED1@gmail.com
бХимический факультет МГУ им. М.В. Ломоносова, Воробьевы горы, д. 1 стр. 3,
119991 Москва, Россия
вDepartment of Anatomy and Cell Biology, Faculty of Medicine, McGill University, Montreal
гDepartment of Pediatrics and Biochemistry, Faculty of Medicine, University of Montreal.

Поступила в  редакцию 16.05.2008 г.
В настоящее время общепризнанно, что  белковое фосфорилирование является одним из основных регуляторных механизмов в  биологических системах. Это, в  свою очередь, привело к  быстрому развитию методов анализа всей совокупности фосфорилированных белков в  живой клетке,  т. н. фосфопротеома. Одним из основных методов, используемых в  фосфопротеомном анализе,  является выделение фосфобелков и  фосфопептидов, которое позволяет уменьшить долю нефосфорилированных компонентов сложной смеси и  тем самым упростить ее анализ. В данной работе нами была синтезирована и протестирована новая афинная фаза для выделения фосфопептидов. Разделение основано на взаимодействии фосфогрупп пептидов с  ионами алюминия ковалентно иммобилизованными на стационарной фазе, представляющей собой  сефадекс G25. Нами была проведена оптимизация условий разделения, позволяющая снизить  уровень неспецифического связывания. Метод был протестирован на модельных белках – казеине  и  бычьем сывороточном альбумине, а  также на белках печени мыши.

ВЕРНУТЬСЯ К ОГЛАВЛЕНИЮ