Масс-спектрометрия в исследовании внеклеточных ферментов
T7N1
Масс-спектрометрия в исследовании
продуцируемых микроскопическими
грибами внеклеточных ферментов
Александр Васильевич Гусаков1, Маргарита Викторовна Семенова2,
Аркадий Пантелеймонович Синицын1,2
1 Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова,
химический факультет,
Россия, 119991, Москва, Ленинские горы, д. 1, стр. 11,
E-mail: avgusakov@enzyme.chem.msu.ru
2 Учреждение Российской академии наук
Институт биохимии им. А.Н. Баха РАН,
Россия, 119071, Москва, Ленинский проспект, д. 33/2
Поступила в редакцию 02.06.2009 г.; после переработки —18.11.2009 г.
На примере микроскопических грибов из родов Aspergillus, Trichoderma, Penicillium, Chrysosporium и др. рассмотрены возможности масс-спектрометрии для идентификации и исследования секретируемых этими продуцентами внеклеточных ферментов — карбогидраз, протеиназ, эстераз и т.д. Метод масс-спектрометрического картирования пептидов в сочетании с доступными через Интернет программами для анализа полученных данных в режиме on line (MASCOT, Aldente, FindPept, FindMod, GlycoMod) позволяет быстро и надежно идентифицировать как индивидуальные ферменты, так и во многих случаях отдельные компоненты грубых мультиферментных препаратов, не прибегая к их очистке, а также дает возможность дискриминировать гены, кодирующие ферменты с одинаковой субстратной специфичностью. В качестве других энзимологических приложений метода даны примеры выявления наличия или отсутствия структурных доменов в молекулах карбогидраз, обнаружения посттрансляционных и искусственных модификаций в ферментах, а также применения тандемной масс-спектрометрии для de novo секвенирования пептидов.
